膠質(zhì)母細胞瘤（GBM）是成人最常見且惡性程度最高的原發(fā)性腦腫瘤。手術(shù)、放療和替莫唑胺聯(lián)合治療的標準方案下，患者中位總生存期僅約15個月，5年生存率不足10%。更棘手的是，在其他實體瘤中改寫治療格局的免疫檢查點抑制劑在GBM中始終未能獲得理想療效。

為什么GBM對免疫治療如此“冷漠"？答案或許藏在腫瘤微環(huán)境的空間結(jié)構(gòu)里。

近年來，空間組學尤其是空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)逐步揭示了GBM的腫瘤內(nèi)異質(zhì)性。然而在直接決定細胞功能和治療響應的蛋白質(zhì)層面，基于組織原位的空間蛋白質(zhì)組學研究，尤其是對臨床存檔FFPE樣本的分析，仍相對稀缺。

01、一整套方案還原腫瘤微環(huán)境“地形圖"

在2026年的美國癌癥研究協(xié)會年會（AACR）上，Leica Microsystems與Abcam的聯(lián)合團隊展示了一項研究：利用Cell DIVE™多重免疫熒光成像平臺+Abcam直標重組兔單抗+Aivia人工智能圖像分析，對人GBM的FFPE組織進行超多標空間蛋白質(zhì)組學分析，以單細胞分辨率還原了GBM微環(huán)境的“地形圖"，并揭示了其免疫逃逸的關(guān)鍵機制。

研究團隊從臨床最常見的FFPE組織切片出發(fā)，在單張切片上構(gòu)建了一套20+標志物的重組抗體panel。值得注意的是，所用的抗體全部來自Abcam，經(jīng)FFPE驗證，以熒光直標形式上機，初步測試后即隨機分配到不同成像輪次，未做進一步優(yōu)化以減少偏倚，確保可重復性。

研究所用的抗體panel

全切片成像在Cell DIVE平臺上完成，采用4個熒光通道+DAPI，配合自動去除自發(fā)熒光、校正與拼圖。經(jīng)過多輪迭代染色與成像循環(huán)，完整拼接后的圖像被導入Aivia v15進行融合、分割，以及基于AI的單細胞表型識別，最終實現(xiàn)了對整張組織、海量單細胞的可重復定量分析。

GBM組織的全切片多重成像與基于AI的細胞分割

采用Multiplexed Cell DIVE成像技術(shù)生成的全視野復合圖像，可在組織范圍內(nèi)同時檢測20+種生物標志物；比例尺：500 µm

該圖突出顯示腫瘤微環(huán)境中的細胞形態(tài)特征及空間組織結(jié)構(gòu)；比例尺：50 µm

基于AI引導的細胞及細胞核膜分割結(jié)果，展示了對單個細胞的自動識別與輪廓勾勒，用于后續(xù)單細胞空間分析；比例尺：50 µm

02、“冷腫瘤"真相免疫排斥來自物理屏障

借助這套方案，研究團隊在單細胞層面解析了GBM微環(huán)境，得到了幾條高度一致的結(jié)果：

01.腫瘤細胞高度可塑、增殖

GBM腫瘤細胞同時表達間質(zhì)標志物與神經(jīng)譜系標志物（Vimentin、β-catenin、Olig2、β-III tubulin、S100B、GFAP等），并伴隨高增殖活性。這種多譜系可塑性使腫瘤核心區(qū)結(jié)構(gòu)高度紊亂，細胞毒性T細胞難以進入。

02.髓系細胞富集，筑起物理屏障

CD8?細胞毒性T細胞在GBM中極為稀少，而CD68+、CD11b+等髓系細胞異常富集。空間鄰近分析顯示，CD8? T細胞被擋在腫瘤核心之外，并聚集在髓系細胞周圍。也就是說，髓系細胞像一堵“圍墻"，把殺傷性T細胞擋在了墻外。這提示髓系細胞募集可能是GBM適應性免疫抑制的關(guān)鍵機制之一。

GBM中免疫細胞和腫瘤細胞形成有序的空間微域（microdomain）

03.輔助/調(diào)節(jié)性T細胞“出工不出力"

CD3?與CD4? T細胞在腫瘤核心附近成簇，但其中很可能包含調(diào)節(jié)性T細胞（Treg），缺乏有效的細胞毒性功能。發(fā)生了適應性免疫招募，卻沒有形成有效的抗腫瘤活性，強化了GBM“免疫忽視"（immune ignorance）的特征。

04.免疫排斥與檢查點無關(guān)，免疫治療失效的關(guān)鍵

在這個樣本中，PD-1與PD-L1染色均為陰性，表明細胞毒性T細胞被排斥在外，并非由PD-1/PD-L1檢查點通路介導，而是由髓系細胞/Treg構(gòu)成的物理屏障所致。這從空間生物學角度解釋了為什么免疫檢查點抑制劑在GBM中往往收效甚微。

事實上，2025年的一篇綜述指出，GBM中免疫檢查點抑制劑失敗的核心并非簡單的“靶點缺失"，而是腫瘤微環(huán)境在更深層的結(jié)構(gòu)性免疫抑制，這份海報的結(jié)果為這一假說提供了直接的空間蛋白質(zhì)組證據(jù)。

05.聚類分析揭示結(jié)構(gòu)化的免疫抑制微生態(tài)

聚類分析進一步顯示，腫瘤細胞、髓系細胞、輔助/調(diào)節(jié)性T細胞在空間與功能上高度組織化，提示存在機制上彼此區(qū)分的免疫抑制微生態(tài)。

GBM中CD8+ T細胞（A中洋紅色）與腫瘤細胞（A中綠色）的空間分布

03、從機制到策略GBM免疫治療需要“重寫"

這項工作把GBM的免疫逃逸，從“現(xiàn)象"推進到“機制"：腫瘤可塑性、血管重塑、髓系激活與細胞毒性T細胞排斥，組成了一條清晰的機制鏈路。

從轉(zhuǎn)化研究的角度看，它提示未來的治療策略可能需要靶向髓系屏障、解除Treg介導的免疫抑制、干預腫瘤可塑性，并有可能與過繼性T細胞療法聯(lián)合，才能重建有效的抗腫瘤免疫。

04、可擴展、與臨床兼容的空間蛋白質(zhì)組學方案

更重要的是，這套Cell DIVE多重成像+Abcam直標重組抗體+Aivia AI分析的整合方案，以臨床最常見的FFPE切片為起點，通過標準化、可重復的超多標免疫熒光工作流，結(jié)合AI賦能的單細胞空間表型分析，為神經(jīng)腫瘤乃至更多實體瘤的生物標志物開發(fā)與精準治療，提供了一套可擴展、適用于臨床轉(zhuǎn)化的空間蛋白質(zhì)組研究方案。

Abcam：一次有效，次次可靠的重組抗體

在超多標空間蛋白分析中，結(jié)果可靠與否，很大程度上取決于每一個抗體的特異性、靈敏度與批間一致性。本研究panel中的抗體全部采用經(jīng)FFPE驗證的Abcam重組單抗，并以熒光直標的形式簡化實驗。

Abcam依托兔雜交瘤技術(shù)開發(fā)的RabMAb®重組兔單抗，為這類高要求實驗保駕護航：

• 高特異性：結(jié)果真實可靠，背景低

• 高靈敏度：可以使用更嚴格的條件，而無需擔心信號強度的損失

• 高可重復性：重組技術(shù)生產(chǎn)，抗體批次間差異小，保證長期供應，數(shù)據(jù)高度可重復

Abcam經(jīng)過多年長期的積累，目前已經(jīng)開發(fā)了37,000+的重組單克隆抗體，覆蓋腫瘤、免疫、神經(jīng)科學、表觀、代謝、感染性疾病等多個研究領(lǐng)域。

另外，Abcam還提供超過6,600種經(jīng)IHC-P驗證的無載體抗體：可直接進行抗體偶聯(lián)，無需緩沖液置換或抗體純化步驟，尤其適合Cell DIVE等mIHC多重成像平臺。如需快速偶聯(lián)，還可搭配Lightning-Link®偶聯(lián)試劑盒，30秒手動操作，20分鐘反應時間，直標抗體就準備好了！

Leica Microsystems：Cell DIVE全自動單細胞空間蛋白組系統(tǒng)

• 靈活開放的平臺：350+驗證抗體，10+驗證并發(fā)表的抗體組合，使用成本友好

• 多重免疫熒光成像：支持在單張切片上對多達60個標志物進行高分辨率成像

• 染料失活工藝：高效可靠且溫和，支持超多重循環(huán)染色并保持樣本完整性

• 圖像質(zhì)量：16位sCMOS相機搭配專業(yè)圖像處理算法，確保全組織成像質(zhì)量

• 高通量：全自動版本支持一站式工作流，最多可連續(xù)處理15張切片

• AI圖像分析：Aivia基于AI完成圖像融合、細胞分割與表征，把海量圖像數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為可重復、可量化的單細胞空間表型結(jié)果

參考文獻

[1]. Robinson SD, Filippopoulou C, Besta S, et al. Spatial biology - unravelling complexity within the glioblastoma microenvironment. Trends Mol Med, 2025, 31(9): 846-859.

[2]. Jabri A, Mhannayeh A, Taftafa B, et al. Recent advances in immunotherapy for gliomas: overcoming barriers and advancing precision strategies. Front Immunol, 2025, 16:1690464.